Принципи на синтеза на нуклеинска киселина

Синтезата на нуклеинската киселина се изведува со користење на методот на цврста фаза на сиалична амид триглицерид, при што 3' крајот на ДНК се имобилизира на супстрат од цврста фаза и нуклеотидите се додаваат во насока од 3' до 5' додека не се синтетизира саканиот фрагмент на ДНК. .Ова се разликува од синтезата на ДНК со примена на ДНК полимераза.

3' крајот на првата база е имобилизиран на CPG за време на синтезата, 5'-OH од следната база е заштитен со ди-p-толил тритил DMT, амино групата на базата е заштитена со бензоева киселина и 3' -OH потоа се активира со амино фосфатно соединение.1 база од 5 5'-OH од 1 база и 3'-OH од следната база формираат фосфитен триглицерид, кој потоа се оксидира со јод до фосфат триглицерид, заштитното средство на втората база 5'-OH се отстранува со додавањето на дихлороцетна киселина ДМ циклуси преку додавање на следната база, а по синтезата заштитното средство на 5'-OH се отстранува со слаба киселина. со концентриран амониум хидроксид под загревање, амониум хидроксидот се отстранува, фрагментот се суши во вакуум, а нуклеинската киселина се прочистува со течна хроматографија или PAGE.

Чекори на синтеза на олиго

Деблокирање

На5-крајната DMT заштитна група се отстранува со додавање TCA раствор.

Активирање

Мешање на активаторот со олигонуклеотидниот мономер за да се формира активниот олигонуклеотиден мономерен посредник.

Спојка

5-терминалната хидроксилна група реагира со активниот олигонуклеотиден посредник во антигенеративна реакција на кондензација за да формира нестабилна фосфитна триглицеридна врска.

Затворање 

Додавањето на средство за покривање врши реакција на затнување на ацетилација со вишок хидроксилни групи кои не се вклучени во реакцијата на кондензација.

Оксидација 

Додавањето на јоден раствор кој содржи вода реагира со нестабилни фосфитни врски со оксидација за да формира стабилни триглицеридни врски на фосфорна киселина.

Цијаноетил расцепување

Производот на нуклеинска киселина по синтезата, со додавање на раствор на ДЕА за отстранување на цијаноетилната група од фосфатната триглицеридна врска.

Cleaved&Deprotection

Фрагментите на нуклеинската киселина се отцепуваат од носачот на цврстата фаза со додавање на концентриран раствор на амониум хидроксид и потоа се загреваат за да се отстранат заштитните групи од водородните врски на базите.